皮卡 PIKA
@xPIKAx
Fri, Apr 23, 2021 2:18 PM
1
[PCR冷知識] 現在許多master mix裡的dNTP，用的不是ATCG，而是AUCG，以dUTP取代dTTP
內含UNG(uracil-N-glycosylase)
在50度C左右UNG會把含U的DNA吃光光
95度C時UNG會失去活性
這是為了製造template(用ATCG)跟合成產生的DNA(用AUCG)的差異
為此可以避免先前PCR產物的污染
因此若使用的reagent是dUTP並含有UNG，在剛開始時，先執行50度C，會把PCR產物全部吃光光，95度C inactivate UNG後，就可以乾淨地開始PCR
掰噗~
@baipu
說
Fri, Apr 23, 2021 2:18 PM
好餓喔...
皮卡 PIKA
@xPIKAx
Fri, Apr 23, 2021 2:22 PM
最近因為某些契機才知道
去查了一下
長知識勒
以前一直以為就是用ATCG(因為以前自己配dNTP都是用dATP,dTTP,dCTP,dGTP去配xD
皮卡 PIKA
@xPIKAx
Fri, Apr 23, 2021 2:29 PM
然後這種情況RT別用dUTP
不然你的cDNA在PCR時，一起被吃光光
template也沒了xD
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內含UNG(uracil-N-glycosylase)
在50度C左右UNG會把含U的DNA吃光光
95度C時UNG會失去活性
這是為了製造template(用ATCG)跟合成產生的DNA(用AUCG)的差異
為此可以避免先前PCR產物的污染
因此若使用的reagent是dUTP並含有UNG，在剛開始時，先執行50度C，會把PCR產物全部吃光光，95度C inactivate UNG後，就可以乾淨地開始PCR
去查了一下
長知識勒
以前一直以為就是用ATCG(因為以前自己配dNTP都是用dATP,dTTP,dCTP,dGTP去配xD
不然你的cDNA在PCR時，一起被吃光光
template也沒了xD